Установление инфекционности заболевания

В процессе установления инфекционности заболевания должно быть доказано что конкретное поражение является инфекционной болезнью, то есть заболеванием вызванным возбудителем болезни (в нашем случае – фитовирусом). Основным признаком инфекционности является способность передачи патогена от больных растений к здоровым^[4]. Вирусную природу заболевания растений определяют несколькими методами. В первую очередь испытывают механическую инокуляцию сока и только при негативных результатах переходят к другим способам, избираемым в зависимости от вида растения и симптоматики заболевания^[1].

Векторное заражение злаков

Векторное заражение злаков

---

Переносчик заболевания – Большая злаковая тля (Macrosiphum avenae)^[3] 

Механическая инокуляция сока

Инокуляция сока (введение инфицированного сока в здоровое растение) является наиболее простым методом искусственного заражения растений^[2].

Вначале готовят инокулюм. При этом инфекционность вируса в выжатом соке стабилизируют путем добавления, при растирании в фарфоровой ступке исследуемого растительного материала, 0,1µ фосфорного буфера с одним из видов стабилизаторов инфекционности (0,1% сульфата натрия, 0,01% дифенильтомочевины, 0,1 µ диэтилдитиокарбоната натрия)^[2].

Суспензированние исследуемого материала проводят на холоде при +3ºC–+ 5ºC. Иногда материал замораживают перед измельчением. Суспензию используют сразу после приготовления^[2].

При приготовлении инокулюма может применяться адсорбент (активированный уголь, бетонит). Вирус адсорбированный на частицах меньше подвержен воздействию инактивирующих факторов. Адсорбент добавляется в соотношении 10 % от объема инокулюма^[2].

Затем лист инфицируемого растения перед нанесением инокулюма немного припудривается порошком карборунда, размеры частиц которого составляют от 5 до 20 мкм^[2].

Инокулюм наносят на лист стеклянным шпателем, кусочком поролона или пальцами, и легким движением растирают по поверхности листовой пластинки. Спустя несколько минут инокулюм должен быть смыт с листа водой из резиновой груши или пульверизатора. Инокулированные растений притеняются на 24–48 часов^[2].

Время от инокуляции до появления первых признаков заражения составляет от трех до тридцати дней. Спустя указанное время на инокулированных листьях, при условии, что заболевание действительно является инфекционным, появляются симптомы вирусных болезней растений^[2].

Векторное заражение

Векторное заражение – определение инфекционности заболевания с участием беспозвоночных переносчиков (векторов). Для этого используются популяции заведомо невирофорных особей. Их отлавливают в природе на здоровых растениях и помещают в изоляторы для размножения. После этого их подсаживают на больное растение и выдерживают на нем необходимое для передачи инфекции количество времени. Тли, при неперсистентной передаче, выдерживаются несколько минут, а при персистентной передаче – до семи суток. Цикадки должны питаться на больном растении пять суток.

После приобретения вирофорности переносчиков пересаживают на здоровые растения. Все работы проводятся в специальных изоляторах^[2].

Наблюдения за заражаемыми растениями ведутся в течении 1,5–2 месяцев^[1].

Прививка

Изучение инфекционности заболевания проводят двумя способами: прививкой в пазуху листа верхушкой побега или черенком листа и сближение срезанным стеблем. Отмечается, что для передачи вирусной инфекции необходимости в срастании привоя с подвоем нет. Необходимо только соблюдать условие сохранения привоя в живом состоянии в течении 3–5 суток^[2].

Привитые растения должны быть помещены в условия повышенной влажности или место прививки надежно прикрыто изолятором из пленки. Признаки заражения могут проявиться на молодых листьях выше места прививки^[2].