Гидролазы

Реакция питательных сред на воздействие протеаз бактерий

Реакция питательных сред на воздействие протеаз бактерий

---

1. Формы разжижения желатина; 2. Разложение козеина молока; 3. Тест на индол с помощью индикаторных полосок (а) и при помощи реактива Ковача (б); 4. Тест на сероводород:

а – положительный тест;

б – контроль^[3].

Использование гидролаз при идентификации бактерии

Идентификацию бактерий проводят путем изучения ферментов, катализирующих расщепление углеводов и белков^[3].

Способность бактерий расщеплять углеводы называют сахаролитическойактивностью^[3].

Способность бактерий расщеплять белки называют протеолитическойактивностью^[3].

Оба признака выявляют по конечным продуктам расщепления субстратов после посева культуры на питательные среды^[3].

При ферментации сахаров выявляется образование различных кислот: молочной, уксусной, муравьиной, или кислоты и газа (водорода или углекислоты)^[3].

При распаде белков – образование сероводорода, щелочей, аммиака, индола^[3].

Выявление гликозидаз

Гликозидазы выявляют с помощью жидких и полужидких сред Гисса^[3].

Жидкие среды Гисса – это пептонная вода, содержащая один из углеводородов (лактоза, глюкоза, мальтоза, сахароза) и индикатор Андреде (кислый фуксин (солянокислый розанилин) C₂0H₂0N₃Cl, обесцвеченный щелочью). Для улавливания газов в пробирке размещают поплавок (микропробирка вверх дном). Поплавок при стерилизации заполняется средой. Исходный цвет среды является соломенно-желтым. При расщеплении углеводорода до кислоты наблюдается изменение цвета среды на красный. Одновременное образование газа приводит к его накоплению в поплавке. При отсутствии реакции расщепления углеводорода цвет среды не меняется^[3].

Полужидкие среды Гисса содержат 0,2%–0,5% мясо-пептонного агара, 1% углеводов и индикатоа ВР (вводно-голубая краска, рзоловая кислота). Исходный цвет среды – розово-серый. При расщеплении углевода среда меняет цвет на голубой. Образование газа приводит к разрывам в среде или появлению пузырьков газа^[3].

Установлено, что каждый вид бактерий ферментирует только определенный спектр углеводов. В связи с этим в одних пробирках среда меняет свой цвет, а в других остается не изменой. В результате наблюдается так называемый «пестрый ряд». Таким образом, для каждого вида бактерии характерен свой «пестрый ряд». Это позволяет отличать виды бактерий друг от друга^[3].

Выявление протеаз

Протеазы бактерий выявляют посевом чистой культуры на питательные среды: МПЖ (мясопептонный желатин), молочный агар, МПБ (мясопептонный бульон). Результат оценивают исходя из разжижения желатина, разложения козеина молока вокруг колоний или по конечным продуктам распада белков^[3].

Отмечается, что различные виды бактерий характеризуются разной формой разжижения желатина. В частности, золотистый стафилококк разжижает желатин в форме воронки, а холерный вибрион – в форме гвоздя^[3].

Протеолиз казеина проявляется образованием зон просветления, из-за разложения последнего, вокруг бактериальных колоний^[3].

Конечные продукты распада белков различны. В зависимости от вида бактерий это может быть идол, сероводород, аммиак^[3].

Обнаружение данных продуктов производят при помощи индикаторных бумажек. Их помещают внутрь пробирки между стенкой и ватно-марлевой пробкой^[3].

Индикатор на идол – щавелевая кислота. Пропитанная щавелевой кислотой бумажка при выделении идола становится розовой. Часто тестирование бактериальных культур на образование идола проводиться при помощи реактива Ковача или реактива Эрлиха^[3].

Сероводород обнаруживают при помощи ацетата свинца. При выделении сероводорода белый цвет бумажки меняется на черный из-за образования сульфита свинца^[3].

Аммиак обнаруживают при помощи лакмусовой бумаги. При выделении аммиака она приобретает синий цвет^[3].