Культивирование зоопатогенных вирусов – выращивание зоовирусов в искусственных условиях, проводится путем заражения животных или культурных клеток и тканей[2].
Культивирование зоовирусов производится в процессе изучения клинической картины и патогенеза вирусных заболеваний, при необходимости диагностики вирусных инфекций, для изготовления диагностических и вакцинных препаратов[3].
Впервые культивирование вируса бешенства осуществил В. Гальтье в 1879 году. Для этого кролик был заражен мозгом больной собаки. А. Левенштейн в 1919 году впервые опубликовал данные об успешной передаче вирусов герпеса к кролику от человека[2].
В. Грютер в 1920 году доказал, что вирус герпеса возможно культивировать на кроликах. Ф. Паркер и В.Н. Най в 1925 году доказали способность вируса коровьей оспы репродуцироваться в тканевой культуре. А.М. Вудрафф и Э. Гудпасчер продемонстрировали возможность культивирования зоовирусов, в частности, вируса оспы птиц, на хорионаллантоисной оболочке эмбрионов кур[2].
В 1954 году американские вирусологи Дж. Эндерс и Т. Уэллер получили Нобелевскую премию за разработку техники культивирования полиомиелита в тканевых культурах[3].
Известно, что вирусы способны репродуцироваться только в живых клетках. Установлено существование трех биологических систем в которых возможно культивирование вирусов вообще и зоовирусов в частности:
В целях заражения биологической системы конкретным видом вируса из исследуемого материала готовят суспензию. Для освобождения от посторонней микрофлоры (грибов и бактерий) в нее добавляют антибиотики. Готовый материал вводят в биологическую систему[3].
В качестве лабораторных животных в вирусологических исследованиях используют белых крыс, белых мышей, морских свинок, золотистых хомячков, кроликов и другие виды[3].
Заражение животных вируссодержащим материалом проводится различными способами: внутримышечно, подкожно, внутривенно, интраназально и прочее. Способ заражения выбирается в зависимости от ткани, поражаемой данным видом вируса (тропизм вируса)[3].
Репродукцию вируса в организме животного оценивают: по развитию видимых клинических симптомов или по патоморфологическим изменениям тканей и органов. Интенсивность репродукции вирусов показывают реакции гемагглютинации (РГА) с суспензией из органов, содержащих вирусы. Данная реакция основана на способности вирусов вызывать склеивание (агглютинацию) эритроцитов человека, птиц и млекопитающих при взаимодействии вирусных белков с рецепторами эритроцитов[3].
1. На хорионаллантоисную оболочку; 2. На аллантоисную полость; 3. В амниотическую полость; 4. В желточный мешок; 5. В тело эмбриона[3].
Развивающиеся куриные эмбрионы (РКЭ) пригодные для вирусологических исследований имеют возраст 5–12 дней. Их использование дает возможность изготовить большое количество вируссодержащего материала и используется при производстве вакцин[3].
Заражения РКЭ производят различными способами:
Репродукцию вирусов устанавливают по гибели эмбриона, патологическим изменениям в оболочках и тканях, положительной реакции гемагглютинации (РГА). Гибель эмбриона определяют при прекращении его движения, выявляемое при овоскопировании (просвечивании)[3].
Погибшие эмбрионы вскрывают. Извлекают их содержимое и проводят патологоанатомическое исследование. Эмбриональную жидкость смешивают с эритроцитами для определения гемагглютинации[3].
Культура клеток является широко используемой биологической системой для культивирования вирусов. Ее получают из органов и тканей животных, птиц, человека. Клетки, полученные из разнообразных тканей и органов теплокровных животных, размножают вне организма в специальной лабораторной посуде на искусственных питательных средах[3].
Питательные среды, используемые для данной цели делят на:
При выращивании клеточных культур соблюдаются требования строгой антисептики. Кроме того, используется посуда только из стекла нейтрального состава и сложные по составу питательные среды, содержащие минеральные соли, витамины, аминокислоты, глюкозу, сыворотку крови, буферные растворы. Для успешного выращивания клеточных структур в питательную среду добавляют антибиотики для подавления нежелательной микрофлоры. Оптимум температуры культивирования – + 36ºC–38,5ºC[3].
При заражении культур из сосудов с выросшим монослоем клеток удаляют остатки питательной среды. Затем монослой отмывают раствором Хенкса и вносят в него материал содержащий вирус. Спустя час – полтора остатки вируссодержащего материала удаляют, вносят поддерживающую питательную среду и инкубируют культуру в термостате[3].
Репродукцию культивируемых вирусов оценивают по следующим феноменам:
Составитель: Григоровская П.И.
Страница внесена: 01.12.20 17:15
Последнее обновление: 11.05.21 16:50
Карпова О.В. Вирусология, Конспект лекций, Биофак МГУ, Фонд «Вольное дело», 2019 – 161 стр
Леннет Э. Шмидт Н. Лабораторная диагностика вирусных и риккетсиозных заболеваний, пер. с англ. Проф. С.Г. Дроздова. – Москва: Медицина, 1974 – 775 стр
Литусов Н.В. Общая микробиология. Иллюстрированное учебное пособие. – Екатеринбург: Изд-во УГМУ, 2015. – 516 с.
Лысак В.В. Микробиология : учеб. пособие / В. В. Лысак. – Минск: БГУ, 2007 – 430 с
Оставьте свой отзыв:
Отзывы:
Комментарии для сайта Cackle