Культурально-морфологическая характеристика
Штамм Arthrobotrys oligospora F-1303 – штамм нематофагового гриба Arthrobotrys oligospora Т-15, относящегося к типу Аскомицеты (Ascomycota). Arthrobotrys oligospora открыт в 1850 году Георгом Фрезениусом. Это самый распространенный вид нематофагов в мире[3].
Данный штамм Arthrobotrys oligospora выделен из почвы, зараженной картофельной золотистой нематодой в садовом обществе Колос, р.п. Кольцово, Новосибирской обл. в мае 2015 г. и депонирован во Всероссийской коллекции промышленных микроорганизмов (ВКПМ) под номером F-1303.
На агаризованной питательной среде, а именно на ПКА (пептонно-кукурузном агаре) (ПКА), следующего состава: глюкоза – 10 г; хлористый натрий – 5 г; углекислый кальций – 0,5 г; кукурузный экстракт – 5 г; пептон – 5 г; агар-агар – 20 г; вода водопроводная – до 1 л, штамм Arthrobotrys oligospora F-1303 образует колонии с нижеследующими морфологическими признаками:
- мицелий белый плотный ватоообразный, немного поднимающийся;
- край колонии ровный;
- размер колоний: на 3 сутки – 30 мм; на 5 сутки – 55 мм; на 10 сутки – 90 мм;
- спороношение – конидиями;
- реверзум (обратная сторона чашки с колонией) – от светло-песочного до светло- коричневого цвета;
- цвет колонии по мере старения приобретает слегка песочный оттенок[3].
Микроморфологические признаки штамм Arthrobotrys oligospora F-1303:
- гифы мицелия ровные, размером 4-8 мкм;
- конидии формируются на простых прямых конидиеносцах, длиной от 300 до 500 мкм, ширина у основания 7 – 12 мкм, у дистального конца 4 – 6 мкм;
- конидии двухклеточные, удлиненно-грушевидные, дистальная клетка почти в два раза больше проксимальной, размером 25–27×10–14 мкм, собраны в виде головок по 8–12 штук на вершинах конидиеносцев, а также в виде отдельных гроздей на конидиеносце, число которых может достигать 5–10;
- в почве и в культуре на нематодах образуются толстостенные хламидоспоры, овальной или круглой формы размером 25–35 мкм;
- в присутствии нематод на гифах формируются округлые петли и их сплетения в виде сетей, внутренний размер улавливающих приспособлений в среднем от 25 до 30 мкм, но встречаются округлые кольца до 40 мкм диаметром[3].
Штамм Arthrobotrys oligospora F-1303не является генетически модифицированным. Он не содержит генов других организмов; перенесенных генов резистентности; генетических изменений, связанных с использованием геннотехнических методик[3].
Действие на вредные организмы
Штамм Arthrobotrys oligospora F-1303 поражает подвижные личинки нематод в почве и неподвижные – яйца, окруженные оболочкой цисты, устойчивой к внешним воздействиям[3].
Нематода является основным источником азота для Arthrobotrys oligospora F-1303. Данный гриб образует сложную трехмерную сетку из гиф и захватывает в нее личинки и цисты нематод. Кроме того, штамм синтезирует комплекс соединений, играющий роль ферментов для нематод. Часто для ловли мелких нематод используется только одна петля гифы гриба. Поверхность сети и петлей покрыта клейким веществом, с помощью которого личинки и цисты удерживаются в ловушке. Гифы гриба проникают в захваченную жертву и используют ее биологический материал для роста и развития[2].
Пестициды, содержащие
Arthrobotrys oligospora
для сельского хозяйства:
закончился срок регистрации:
Применение
Штамм Arthrobotrys oligospora F-1303 в сфере защиты растений используется как действующее вещество нематицидов. В России разрешен к использованию Нематофагин-Микопро, П. Данный препарат рекомендован к применению на картофеле для защиты от стеблевой (клубневой) нематоды и северной галловой нематоды[1].
Токсикологические свойства и характеристики
Штамм Arthrobotrys oligospora F-1303 является природным антагонистом нематод. Его относят к третьему классу опасности (умеренно опасные вещества) по отношению к человеку и считают безопасным по отношению к пчелам и другим полезным насекомым[2][1].
Получение
Выращивание биомассы штамма Arthrobotrys oligospora F-1303 производитсяповерхностным и глубинным способами.
Поверхностный способ
Биомассу получают на агаризованных и сыпучих средах. В качестве агаризованной среды используют пептонно-кукурузный агар (ПКА) следующего состава: глюкоза – 10 г; хлористый натрий – 5 г; углекислый кальций – 0,5 г; кукурузный экстракт – 5 г; пептон – 5 г; агар-агар – 20 г; вода водопроводная – до 1 л.
Все компоненты помещают в посуду емкостью 1,5 л и более и производят нагревание смеси для расплавления агар-агара, постоянно помешивая. Возможно использование водяной бани. По факту готовности среда разливается в колбы и флаконы по 200 мл и стерилизуется в автоклаве в течение 40 минут при температуре 120ºCи давлении в 1 атмосферу. По окончании стерилизации среда разливается в стерильные чашки Петри и после остывания засевается кусочками стерильной культуры гриба. Время роста колоний до полного зарастания чашки и появления спороношения при +28 ºC составляет от 12 до 14 суток[2].
Биомассу возможно получить на сыпучей среде. Для этой цели используется зерно пшеницы. К 1 кг зерна добавляют 1,5 л воды и в течении 15 мин пропаривают его для насыщения зерновок водой. Затем удаляют лишнюю воду при помощи сита и добавляют к оставшемуся зерну 5 г мела. Полученную смесь расфасовывают по колбам емкостью 750 мл, заполняя на одну третью часть от объема. Колбы стерилизуют в автоклаве при температуре 120ºC и давлении в 1 атмосферу в течение 40 мин и оставляют для остывания. Затем колбы встряхивают и засевают кусочками мицелия штамма Arthrobotrys oligospora F-1303. На зерне мицелий разрастается две – три недели.
Глубинный способ
Глубинное культивирование осуществляется на жидкой среде, следующего состава: кукурузный экстракт – 7,5 мл; меласса свекловичная – 30 мл; KH2PO4 – 5 г; MgSO4×7H2O – 2 г; NaNO3 – 5 г; вода водопроводная – до 1 л.
Среду разливают в колбы по 100 мл и производят засев спорово-мицелярной суспензией штамма из расчета 5 мл на 100 мл среды. Суспензию получают из агаризованной культуры штамма гриба, выращиваемой в биологической пробирке на скошенном агаре. Колбы размещают в термостатированные качалки и производят выращивание. При температуре 28ºC, скорости 18 оборотов/мин этот процесс занимает от пяти до шести суток. Признаком зрелости биомассы служит наличие спиралевидных ветвлений на концах, растущих гиф, видимых под микроскопом.
Готовая биомасса характеризуется коричневым цветом, гелеобразной консистенцией и содержанием не менее 15 г/л сухих веществ[2].
Оставьте свой отзыв:
Отзывы:
Комментарии для сайта Cackle