Метод растений-индикаторов

Покраснение листьев черешни душистой

Покраснение листьев черешни душистой

---

Тест-растение при заражении little cherry virus 2 (LCV-2)^[4]

 

Метод растений-индикаторов широко используется на практике для идентификации вирусов, вирозов, фитоплазмозов, бактериозов, микозов наряду с прочими методами диагностики. В частности, иммунодиагностикой вирозов и молекулярно-биологической диагностикой вирозов^[1].

Применение метода растений-индикаторов при диагностике вирусов

Метод растений-индикаторов применяется ко всем известным фитовирусам. Вирусы с широким кругом поражаемых растений диагностируются на многих тест-растениях. Некоторые узкоспециализированные вирусы – на растениях одного семейства или одного рода^[3].

Метод растений-индикаторов применяется:

• для точного определения вида вируса;
• для диагностики смешанных вирусных инфекций;
• для выделения отдельных видов вирусов;
• для размножения вирусов в целях получения очищенных вирусных препаратов, используемых для анализа морфологии вирионов и получения антисывороток;
• для выявления штаммовых различий вида вируса^[1][3].

Кроме того, тест-растения с местной некротической реакцией обеспечивают возможность проведения биологического титрования вирусов – количественного определения относительной концентрации вирионов в соке, суспензии, экстракте^[3].

Методика работы

Учреждения, занимающиеся первичным семеноводством картофеля, широко используют заражение отдельных листьев растений-индикаторов, реагирующих на вирусы локальными некрозами. Для этого листья размещают под светоустановками во влажных камерах с определенным температурным режимом. Выбор режима зависит от вида вируса. Эта модификация метода используется, в частности, для вируса табачной мозаики. В качестве тест-растений применяются табак клейкий (Nicotiana glutinosa) и табак обыкновенный (Nicotiana tabacum)^[2].

Для заражения используют молодые, интенсивно растущие растения. Двудольные растения-индикаторы заражают в фазу двух-трех настоящих листьев. В отдельных случаях – в фазу развития примордиальных листьев (для вируса мозаики люцерны на фасоли) и семядольных листьев (для вируса некроза табака на огурце)^[2].

Однодольные растения (злаковые) – в фазу одного-двух листьев. Чувствительность к вирусам повышается при помещении растений-индикаторов на трое суток в затенение^[2].

Заражение обычно производят механическим путем. Для этого натирают листья соком исследуемого растения, приготовив предварительно из него инокулюм. Его готовят путем растирания листьев исследуемого растения в продезинфицированной ступке. Для стабилизации вируса добавляют натриево-калийный фосфат, уголь, аскорбиновую кислоту, сульфит натрия, гипосульфит натрия, триогликолиевую кислоту, кофеин и другие химические вещества, способствующие сохранению инфекционности вируса^[2].

Для увеличения «ворот инфекции» в инокулюм и на поверхность листа добавляют абразивные вещества (карбид кремния, окись алюминия, целит)^[2].

Листья натирают легкими движениями с помощью поролоновой губки, смоченной в инокулюме. Через несколько минут его смывают водой из пульверизатора. После внесения инфекции растение выдерживают в затененном месте в течении 12–24 часов, для снижения последствий травмирования^[2].

Наблюдения за тест-растениями начинают через один или два дня после заражения и проводят регулярно в течении четырех недель. При этом обращают внимание как на инокулированные листья, так и на отрастающие. Признаки местной реакции появляются спустя 3–12 суток после инокуляции, а системной – через 7–30 дней^[2].

Примеры различных типов тест-растений на вирусы

Отдельные примеры реакции растений-индикаторов на вирусы приведены в таблице. Использованы следующие условные обозначения симптомов вирусных заболевания, проявляющихся на растениях-индикаторах: Chl – хлоротичный, Dis – деформация, En – энации, IV – междужилковый, L– местная реакция, LeAb – опадение листьев, LLN – местные повреждения, LeChl – хлороз листьев, LeDis – деформация листьев, LeN – некроз листьев, M – мозаика, N – некроз, NQL– некротический дубовидный рисунок, Ri – кольца, S – системная реакция, Sp – пятнистость, StN – некроз стебля, Stu– задержка роста, Y– желтый, VN – некроз жилок, VC– посветление жилок, LeCu– курчавость листьев^[2].